
文题释义:
外泌体:是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下3种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而激活靶细胞内的信号通路;二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而激活细胞内的信号通路;三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性地释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。
miRNA:是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子。miRNA在细胞分化、生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用。
背景:脂肪间充质干细胞衍生外泌体(adipose-derivedmesenchymalstemcellsreleasedexosomes,AMSC-Exos)中miR-126-3p可作为糖尿病的一种潜在生物标志物,但其对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用及其相关机制研究较少。
目的:探究AMSC-Exos中miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的效用及作用机制。
方法:①以30mmol/L葡萄糖与100µmol/L棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞糖脂毒性体外模型;②收集第4代脂肪间充质干细胞上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径分布范围;③AMSC-Exos处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测活性氧水平及细胞凋亡率,ELISA检测培养上清中炎症因子水平;④RT-qPCR分析AMSC-Exos、与脂肪间充质干细胞共培养后正常人脐静脉内皮细胞中miR-126-3pmRNA相对表达水平;⑤miR-126-3p转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,CCK-8检测细胞增殖情况,Westernblot检测凋亡蛋白的表达量;⑥生物信息学软件预测和分析miR-126-3p靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证,并预测信号通路;⑦CRK转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Westernblot检测凋亡蛋白及p-AKT的表达量;⑧AKT通路抑制剂RG7440与miR-126-3p过表达/AMSC-Exos共处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Westernblot检测凋亡蛋白的表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率。
缩略语:人脐静脉内皮细胞:humanumbilicalveinothelialcells,HUVECs;脂肪间充质干细胞衍生外泌体:adipose-derivedmesenchymalstemcellsreleasedexosomes,AMSC-Exos

(林波)
中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程
关键词:脂肪间充质干细胞,外泌体,miR-126-3p,人脐静脉内皮细胞,糖脂毒性,AKT通路
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